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倉鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9) ELISA試劑盒 使用目的: 為定量(性)測定活化的目標濃度的血清,血漿,組織勻漿,細胞培養上清及其他生物液體。研究使用不是用于診斷或治療程序。 如(ru)果你有(you)任何問題,請上(shang)海義森生(sheng)物科技有(you)限(xian)公司(si)。
更新(xin)時(shi)間:2016-01-18
倉鼠明膠酶B(Gelatinase B)ELISA試劑盒
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑(ji) | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品(960μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶(mei)標(biao)包被板 | 12孔×4條 | 9 | 標準品稀釋液(ye) | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密(mi)封(feng)袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biao)本放(fang)于-20℃保存,但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biao)準品(pin)的稀(xi)釋:本試劑(ji)盒(he)提(ti)供原倍標(biao)準品(pin)一支,用戶可按照(zhao)下列圖表在小試管中進行稀(xi)釋。
480μg/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
240μg/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120μg/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60μg/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30μg/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設空(kong)白(bai)(bai)孔(空(kong)白(bai)(bai)對照(zhao)孔不加樣品及酶標(biao)試劑,其余各步操(cao)作相同(tong))、標(biao)準孔、待(dai)測樣品孔(kong)。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部(bu),盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dong)混勻(yun)。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封(feng)板膜,棄(qi)去液體(ti),甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避(bi)光顯色15分鐘.
10. 終(zhong)(zhong)止:每(mei)孔加終(zhong)(zhong)止液50μl,終止反應(此時藍色(se)立(li)轉黃色(se))。
11. 測定(ding):以(yi)空(kong)白空(kong)調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在(zai)加(jia)終止
倉鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9) ELISA試劑盒
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shi)際濃(nong)度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時(shi)可在水浴中加(jia)溫(wen)助溶,洗(xi)滌時不影(ying)響(xiang)結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍(bei)數(shu)(×n×5)。
5. 封板膜只限(xian)一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1.試劑(ji)盒保存(cun):;2-8℃。
2.有效期:6個月